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1、土壤盐渍化影响水稻生长发育。科研人员将水稻耐盐基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉更88中，培育出了4株耐盐碱水稻新品种。其操作流程及相关限制酶识别序列和切割位点如下图，图中Ⅰ~Ⅲ为限制酶的酶切位点，bar为抗除草剂基因，Kanr为卡那霉素抗性基因。请回答：
(1)、过程①需要模板DNA、（同时提供原料和能量）、酶、2种引物、Mg2+等。被转化的根瘤农杆菌会将Ti质粒的转移到水稻的上。(2)、过程①所用引物如下，则过程②使用的限制酶是和 ， 限制酶识别序列应该添加在引物的端。
(3)、花椰菜病毒启动子含有的核苷酸序列，本研究中设计两个相同启动子分别连接bar和目的基因，其目的是。(4)、科研人员采用特定的方法大量提取成功转化的4株植株叶片的基因组DNA（目的基因中不含AAGCTT），用Hind Ⅲ完全消化，消化产物经电泳、转膜后与目的基因的探针杂交，其杂交结果如图所示（图中数字标号代表转化成功的植株）。下列有关分析正确的有。
①还有不含目的基因的DNA条带在图中没有显示
②杂交带位置不同说明Hind Ⅲ消化形成的DNA片段长度不同
③相同位置上杂交带对应DNA片段的脱氧核苷酸序列相同
④目的基因插入受体细胞核DNA的位置和数量都是随机的
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2、
Ⅰ下图表示科学家通过植物细胞工程，培育“矮牵牛—粉蓝烟草”杂种植株的过程。
（1）步骤①常用含有酶的溶液处理离体细胞，既能获得2种植物细胞的原生质体，又能避免原生质体因过度吸水而破裂。
（2）步骤③细胞融合完成的标志是 ， 获得的融合细胞至少有种。若换用矮牵牛的叶肉细胞和粉蓝烟草的细胞重做该实验，则更易筛选出杂种细胞。
（3）“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含条染色体， 属于倍体植株。
Ⅱ.银杏的次生代谢产物银杏黄酮、银杏内酯等具有良好的药用效果，一般从叶片中取得，但传统栽植方法周期长、成本高、受环境影响大，无法很好满足市场需求。因而利用组织培养技术，从愈伤组织中提取，具有一定的研究意义与应用前景。
（4）外植体往往选自生长旺盛的部位，但也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞在处理时化学药品渗透较快，后续用多次冲洗也不易清除，导致细胞失活甚至破裂。
（5）将愈伤组织转入到培养基中进行扩大培养，以提取次生代谢物。该过程与植物组织培养相比的优点有。
A．细胞与培养基的结合更加充分 B．受培养基中成分差异的影响较小
C．对环境不敏感 D．对营养物质的吸收更容易
（6）研究表明，用塑料膜或玻璃纸等通气不良的介质封口，可提升银杏黄酮和银杏内酯的产量，原因是胁迫细胞诱导产生更多的次生代谢物。
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3、酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)、为分离培养该酵母菌，配制培养基时应以为唯一碳源，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，及时对培养基进行分装，并进行灭菌。(2)、取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。经培养，可在培养基的部位出现菌落。(3)、挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的是。a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
d．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
(4)、步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证的充足供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于 ， 才能达到每毫升4×109个活细胞的预期密度。(5)、通过发酵获得的大量的酵母菌菌体，即 ， 可作为饲料蛋白的来源。 -
4、人胰岛素分子容易聚合导致药效降低，可采用PCR技术改造人胰岛素基因（下图），下列说法正确的是（ ）
A、可通过人工合成获取突变型目的基因 B、上述方法可将待突变序列改造成5´-AAGCCC-3´ C、需要在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸 D、通过电泳检测PCR产物，可确定基因是否改造成功 -
5、下列关于重组DNA技术的叙述，错误的是（ ）A、限制酶、DNA连接酶和质粒是重组DNA技术需要使用的基本工具酶 B、限制酶切割DNA分子一次可产生2个游离的磷酸基团，消耗2分子水 C、用做分子运输车的质粒常有特殊的抗生素合成基因，便于重组DNA分子的筛选 D、E.coli DNA连接酶连接平末端的效率远远高于T4 DNA连接酶
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6、交感神经系统可通过去甲肾上腺素影响骨细胞发育。某科研小组为验证交感神经系统抑制骨细胞发育的机理，进行了图1所示实验，实验检测结果如图2，Cxcl12、Oste、mALP、Runx2、mCOL为骨细胞内表达的不同基因。下列叙述不正确的有（ ）
A、图1实验组模拟了交感神经兴奋对MSCs分化为成骨细胞的影响 B、骨细胞置于含有95%氧气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养 C、加入无菌处理的胎牛血清，可提高MSCs存活率 D、交感神经兴奋对MSCs发育中各基因表达起抑制作用 -
7、某兴趣小组试图从土壤中分离分解尿素的细菌，流程如下图所示。下列说法正确的有
A、该实验配制的培养基中不含蛋白胨 B、图中菌液稀释10倍时所加的无菌水的量都为9mL C、实验的合理顺序是“计算→称量→溶解→灭菌→调pH→倒平板→接种土壤样本→培养→计数” D、三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中约有分解尿素的细菌个 -
8、逆转录PCR(RT-PCR）是以mRNA为模板逆转录形成DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增的技术。如图为利用RT-PCR扩增人乳铁蛋白基因的部分过程，相关叙述错误的是（ ）
A、由于基因的选择性表达，人乳铁蛋白基因mRNA应从人乳腺细胞中提取获得 B、过程①②所需的酶分别是逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶，原料均为脱氧核苷酸 C、过程③获得的人乳铁蛋白基因不具有起始密码子、终止密码子的对应序列 D、RT-PCR中，引物P1、P2的长度会影响复性温度以及扩增产物的数量和纯度 -
9、下列有关“DNA的提取与鉴定”“利用PCR扩增DNA片段及电泳鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）A、洋葱切碎加研磨液研磨过滤后，滤液放置4℃冰箱中静置，DNA存在于上清液中 B、将丝状物溶于体积分数95%的酒精，再加入二苯胺试剂在沸水浴中进行DNA鉴定 C、PCR扩增反应体系中dNTP既可以为扩增提供原料，也可以为子链的合成提供能量 D、PCR扩增后，琼脂糖凝胶电泳鉴定结果不止一条条带，可能是引物特异性不强导致
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10、南通某生物兴趣小组的同学用猪肝进行DNA的粗提取与鉴定实验，主要实验流程如下图。相关叙述正确的是（ ）
A、过程①向猪肝组织块中加入研磨液进行充分研磨 B、过程②过滤后弃去滤液，取纱布上的丝状物 C、过程⑤加入酒精后，也可将溶液倒入离心管离心后取上清液 D、过程⑥中A、B试管均会出现蓝色，但B试管中蓝色更深 -
11、胚胎工程技术的应用为优良牲畜的大量繁殖提供了有效的解决办法，如奶牛活体采卵—体外胚胎生产（OPU-IVP）技术，该技术流程如图。已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物，建立了用于奶牛胚胎性别鉴定的PCR体系（SRY-PCR）。下列叙述错误的是（ ）
A、体外受精后，在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体说明受精成功 B、活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞 C、取滋养层细胞进行SRY-PCR，应选择结果为阳性的胚胎进行移植 D、受体母牛不会发生免疫排斥反应，所以移植前不需要进行免疫检查 -
12、精子载体法是以精子作为外源基因载体携带外源基因进入卵细胞，用该方法制备转基因鼠的基本流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A、①过程中精子获能后细胞膜的流动性增加 B、②过程采用体外受精技术，受精卵中的遗传物质都来自父母双方 C、③过程形成的早期胚胎发育到囊胚或原肠胚才能进行胚胎移植 D、④过程进行胚胎移植前需要对供体和受体进行超数排卵处理 -
13、下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）A、体细胞核移植可通过显微操作技术去除卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物 B、制备单克隆抗体时，天然抗原通常可直接刺激多种B细胞和辅助性T细胞 C、将目的基因导入鲫鱼受精卵后，经体外培养获得早期胚胎，再进行胚胎移植 D、囊胚进一步扩大导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫做孵化
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14、我国科学家成功地用iPS细胞克隆出了活体小鼠，部分流程如下图所示，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化酶，TSA为组蛋白脱乙酰酶抑制剂。下列有关叙述错误的是（ ）
A、体外培养小鼠成纤维细胞和卵母细胞时需要加入动物血清 B、步骤①使小鼠成纤维细胞中原本不能表达的部分基因表达 C、步骤②的实质是去除了卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物 D、Kdm4d和TSA促进了重构胚中组蛋白的甲基化和乙酰化 -
15、下图是“三亲婴儿”培育技术路线图。据图分析下列叙述错误的是（ ）
A、“三亲婴儿”同时拥有父亲、母亲及卵母细胞捐献者的部分基因 B、该技术路线涉及动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植等操作 C、卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因不能够遗传给“三亲婴儿” D、核移植的卵母细胞和获能的精子即可直接在培养液中完成受精 -
16、农杆菌是植物基因工程中常用到的一种细菌，下表为用来培养农杆菌的LB培养基配方，下图是对培养的农杆菌进行菌落计数的过程。下列叙述错误的是（ ）
蛋白胨
10.0g
酵母浸粉
5.0g
NaCl
10.0g
蒸馏水
1L
配制完成后，将pH调至7.0
A、图中所用接种方法为稀释涂布平板法 B、按表中配方配制的培养基按用途分属于基础培养基 C、上述LB培养基为液体培养基，一般不用于微生物的分离和鉴定 D、接种后的b、c、d培养基应立即与未接种的培养基一起倒置于培养箱中培养 -
17、某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A、尿素不耐热，常用过滤除菌法对尿素进行处理 B、振荡20min的目的是使土壤中的微生物均匀分布 C、鉴别尿素分解菌需在培养基中加酚红和缓冲对 D、每克该土样中的尿素分解菌约为1.6×106个 -
18、《黄帝内经》中提到：“米酒甘甜，入肝经，能补血行气。”某品牌的甜酒曲中只有需氧型根霉菌，这种菌促进淀粉水解的能力强，产生酒精的能力较弱，因而用其制作的甜米酒甜味明显又略带酒香。下列相关叙述正确的是（ ）A、可用根霉菌和酵母菌一起进行有氧发酵来提高甜米酒的酒精浓度 B、用适宜的选择培养基即可获得某种用于酿制米酒的优质根霉菌种 C、用纯根霉菌制作的甜米酒中只有酒精一种代谢产物因而更加安全 D、蒸好的米饭放至室温再添加甜酒曲可以防止根霉菌因高温而失活
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19、在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是（ ）A、泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气 B、葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后，可直接通入无菌空气制作葡萄醋 C、制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料 D、果酒发酵的适宜温度是30～35℃，果醋发酵的适宜温度是18～30℃
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20、水杨酸是常见的水体污染物，科学家利用基因工程构建智能工程菌，通过向大肠杆菌体内导入含特殊DNA序列的重组质粒，制备水杨酸生物传感器（如图1），为环境污染治理提供新方法。请回答下列问题：
(1)、重组质粒中控制其自身复制的元件是 ， 其基本组成单位是。(2)、RNA聚合酶识别并结合和后，沿基因模板链（从“”或“”中选填）方向转录出mRNA。分析上图可知，当环境中存在水杨酸时，可激活Ps，最终使菌体发出红色荧光，据此可判定环境中的水杨酸浓度。(3)、研究人员欲通过改造重组质粒，实现在相同浓度的水杨酸条件下荧光强度增强为原来的2倍，从而提高传感器的灵敏度。方法一是选择激活能力更强的调控蛋白基因nahRI替代nahR，该改造过程需要用到的工具酶有；方法二是在mrfp基因前插入。(4)、水杨酸羟化酶可催化水杨酸转化为龙胆酸，龙胆酸可被细胞利用。若将水杨酸羟化酶基因与mrfp基因连接成融合基因，则工程菌可同时实现对水杨酸的。现欲通过判定融合基因已准确连接，应选择下图2中的引物组合是。
(5)、工程菌治理环境污染具有成本低、动态治理等优点，但菌株本身会造成水源安全隐患。科学家将ccdA、ccdB两个基因插入原有序列中，使水杨酸被耗尽时菌株即启动“自毁”。已知ccdB基因表达毒蛋白可使工程菌致死，ccdA基因表达抗毒素蛋白导致毒蛋白失效，则ccdA、ccdB分别插入下图3中的、（填字母）位点。